凝膠滲透色譜的操作流程注意細節

　　凝膠滲透色譜是一種基于分子尺寸對聚合物進行分離和分析的技術，其使用流程主要包括以下幾個關鍵步驟：

　　1. 前期準備

　　- 樣品溶解：選取合適的溶劑將樣品充分溶解。溶劑不僅要能溶解多種聚合物，還不能腐蝕儀器部件，并且要與檢測器相匹配。對于一些難溶的樣品，可以采用加熱、攪拌或超聲等方法輔助溶解。

　　- 樣品過濾：溶解后的樣品溶液需要用特定孔徑的濾膜進行過濾，以去除其中的雜質和不溶物，防止它們堵塞色譜柱或影響檢測結果。一般使用0.2μm或0.45μm的濾膜。

　　- 儀器預熱：打開凝膠滲透色譜儀的電源，啟動泵系統，讓流動相在系統中循環一段時間，使儀器達到穩定的工作狀態。同時，檢查儀器的各個部件是否正常工作，如檢測器、進樣器等。

　　2. 參數設置

　　- 流動相選擇與流速設定：根據樣品的性質和色譜柱的要求，選擇合適的流動相。常見的流動相有四氫呋喃、甲苯、二甲基甲酰胺等有機溶劑。然后，設置合適的流動相流速，一般在0.5-1.5ml/min之間。流速過快可能會影響分離效果，流速過慢則會延長分析時間。

　　- 柱溫設定：不同的樣品和色譜柱可能需要不同的柱溫。一般來說，溫度越高，分子的運動越快，分離速度也會越快，但同時也會影響分子與固定相之間的相互作用。因此，需要根據具體情況選擇合適的柱溫，通常在20-60℃之間。

　　- 檢測器參數設置：根據所使用的檢測器類型，設置相應的參數。例如，對于示差折光檢測器，需要設置靈敏度、衰減等參數；對于紫外檢測器，需要設置檢測波長等參數。

　　3. 樣品進樣

　　- 手動進樣：如果儀器配備手動進樣器，先將進樣器的注射器吸取一定量的樣品溶液，一般為50-100μl，然后將注射器的針頭插入進樣口，緩慢注入樣品溶液，注意要避免產生氣泡和漏液。

　　- 自動進樣：如果儀器配備自動進樣器，按照操作界面的提示，設置進樣的體積、速度等參數，然后將樣品溶液放入自動進樣器的樣品盤中，儀器會自動完成進樣操作。

　　4. 數據采集與分析

　　- 基線穩定：在樣品進入色譜柱之前，需要等待基線穩定。基線是檢測器在沒有樣品通過時的響應信號，只有當基線平穩后，才能開始采集數據，以確保數據的準確性。

　　- 數據采集：當樣品進入色譜柱后，檢測器會實時檢測到樣品中各組分的濃度變化，并將其轉化為電信號傳輸給數據采集系統。數據采集系統會記錄下每個時間點的檢測信號強度，形成色譜圖。

　　- 數據分析：根據色譜圖，可以得到樣品中各組分的保留時間、峰面積、峰高等信息。利用這些信息，可以計算出樣品的分子量分布、平均分子量等參數。同時，還可以通過與標準樣品的色譜圖進行對比，對樣品中的未知組分進行定性分析。

　　5. 儀器清洗與維護

　　- 清洗色譜柱：分析結束后，需要用合適的溶劑對色譜柱進行清洗，以去除殘留的樣品和雜質。清洗的時間和流速可以根據具體情況進行調整，一般為30分鐘至數小時不等。

　　- 關機：清洗完成后，關閉泵系統和檢測器的電源，然后按照儀器的操作規程關閉儀器的總電源。最后，對儀器進行清潔和維護，為下一次使用做好準備。